3D細(xì)胞培養(yǎng)板的加樣和操作：細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時(shí)同樣遵循嚴(yán)格無菌的原則，各項(xiàng)操作要保證規(guī)范、科學(xué)，不對細(xì)胞的生長造成額外的影響。這其中zui常見的問題就是如何保證加樣后細(xì)胞的均勻和盡量減少換液對細(xì)胞生長狀態(tài)的影響。

    1.蓋子很松，屬于半開放培養(yǎng)，這樣的目的是透氣（實(shí)際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換，維持培養(yǎng)基的pH值）。

    2.凡事有利必有弊，這樣當(dāng)然增加了污染的可能性。此外這樣還會(huì)使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā)，這對于定量的藥物來說就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔（定期紫外線照，酒精擦洗，盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱）b培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為100%（培養(yǎng)箱內(nèi)放置無菌蒸餾水的水槽）。

    就好像培養(yǎng)皿，也是一個(gè)蓋倒扣的容器，也不會(huì)污染。主要是因?yàn)樯w子“L”型邊緣產(chǎn)生氣流負(fù)壓的緣故，灰塵上面才附著有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無法通過產(chǎn)生負(fù)壓的蓋邊緣的。而透氣作用只是通過空氣的擴(kuò)散，不會(huì)產(chǎn)生氣流，所以只會(huì)透氣不會(huì)透菌。

    我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺內(nèi))，而其它孔中還有細(xì)胞要培養(yǎng).我很擔(dān)心這樣會(huì)污染，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建議。

    在超凈臺內(nèi)如果操作規(guī)范的話應(yīng)該可以的，我想你可以充分利用培養(yǎng)版的蓋子，盡量只暴露要操作的孔，將其它孔用蓋子蓋起來。這是我的一點(diǎn)粗淺的見解，拋磚引玉吧！

    使用前綜合考慮一下，充分使用所以的孔；如果只需要使用少數(shù)的孔可以只用一邊的，其余用蓋子蓋住，我習(xí)慣于先用右側(cè)的孔（右手加樣方便）。

    其實(shí)自己感覺只要注意無菌操作，一般是不會(huì)污染的。操作時(shí)用幾塊玻片把板子一側(cè)墊高，不要把蓋子全打開，一般沒問題。