ELISA試劑盒的實(shí)驗中的封閉液小知識：
ELISA試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn)，蔗糖封閉的原理：
1、elisa實(shí)驗中，蔗糖本身沒有封閉作用;
2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保護(hù)ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護(hù)劑”的作用。
4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加，當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時進(jìn)行處理;那一種更好需要你實(shí)驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。
封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可)，0.4%的明膠，但是實(shí)驗表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了，不會影響實(shí)驗的準(zhǔn)確度。
ELISA實(shí)驗中緩沖溶液等試劑的配置
ELISA實(shí)驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?近剛做了下ELISA實(shí)驗，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?/div>
(1)ELISA實(shí)驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
NaHCO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000ml
(2)ELISA實(shí)驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05%0.5ml
加蒸餾水至1000ml
(3)ELISA實(shí)驗稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA)0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
(4)ELISA實(shí)驗終止液(2M H2SO4)：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
(5)ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2M Na2HPO4(28.4克/L)25.7ml
0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml
加蒸餾水50ml。
(6)ELISA實(shí)驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
底物緩沖液(PH5.5)10ml
0.75%H2O2 32μl
(7)ELISA實(shí)驗ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物緩沖液(PH5.5)1ml
3%H2O2 2μl
(8)ELISA實(shí)驗封閉液：
牛血清白蛋白(BSA)5克
加洗滌緩沖液至100ml。
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。
為了保證ELISA實(shí)驗的準(zhǔn)確性，實(shí)驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。
